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細胞培養(yǎng)中黑點的問題~~

24、培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點，是污染嗎?首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規(guī)則，是否運動，是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規(guī)則，做布朗運動，黑點可能是細胞碎片(可能是細胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復凍融產生的蛋白沉淀引起的，也可能是細胞的代謝產物。如果黑點大小一致，快速移動，很可能是細菌污染。25、如何預防細胞培養(yǎng)中黑點的產生?掌握細胞傳代的最佳時機，不要...

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胎牛血清常見問題集合~

①保存血清最好方法是什么？我們建議血清應保存在-5℃至-20℃。但是若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臒o菌容器內，再放回冷凍。反復凍融會對血清的品質造成不良影響。②如何解凍血清才不會使產品質量受損？我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。③血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理？血清在解凍過程（包括沒有*解凍）或儲存在2-8℃時，血清中的各...

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經費不是很充足，但是用量也蠻大，怎么選血清

經費不是很充足，但是用量也蠻大，怎么選血清這個是最多的一個群體，有些老師有錢，但是這個錢也是自己辛辛苦苦取得的，所以我覺得可以考慮一些小品牌，但是小品牌不代表是假貨，不代表是國產，也不代表是假洋品牌。買的初期，需要去多找?guī)讉€牌子的試用裝同時測試。教你一眼判斷血清的質量淡黃色，透明——2小時以內的國產新生牛血清，膽紅素含量較少；金黃色，透明——產下較長時間的新生牛血清，一般超過2小時了；金黃色，不透明——產下幾天或更久的小牛血清；淡黃色，帶一點微紅，透明——等級高的進口胎牛血清...

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WinSeran細胞培養(yǎng)常見兩個問題（抱團+空泡問題）

WinSeran細胞培養(yǎng)常見兩個問題（抱團+空泡問題）細胞抱團怎么處理?一些懸浮細胞抱團生長是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15ml離心管中，靜置20min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團)。細胞內有空泡，是否是正常...

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如果細胞發(fā)生微生物污染時，應如何處理？

如果細胞發(fā)生微生物污染時，應如何處理？原則上：直接滅菌后丟棄之。當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。1.在無抗生素的培養(yǎng)基...

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細胞培養(yǎng)中，黑點已經產生了，如何進行處理?

黑點已經產生了，如何進行處理?如果判定黑點是污染，請及時將細胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進行：如果是懸浮細胞：收集細胞上清慢速離心(500-600rpm/min，5-6min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細胞：將細胞用PBS洗2-3遍，洗的時候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1min左右，讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細胞，將收集的細胞懸液慢速離心(500-600rpm...

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27個細胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總

1、一般拿到細胞后，應該注意什么?收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各兩張)，排除細胞本身污染的情況。2、何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定，常規(guī)細胞2-3天更換培養(yǎng)基。3、細胞何時進行傳代較好?一般情況下細胞生長至*匯合后就應該傳代，所有細胞生長都有一個要求不宜...

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如何確認細胞交叉污染

交叉污染雖不如微生物污染普遍，但與HELA細胞及其他生長迅速的細胞系間廣泛的交叉污染是個明確的問題，會造成嚴重后果。從聲譽好的細胞庫獲取細胞系、定期檢查細胞系性質及采用良好的無菌技術有助于避免交叉污染。通過DNA指紋圖譜、核型分析和同位素分析可確認有無交叉污染。血清與培養(yǎng)基通常血清的添加比例為10%，當然也可根據細胞狀態(tài)和生長速率適當增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時，最好需對血清的品質進行驗證，防止對實驗造成影響。對于培養(yǎng)基，目前商品化的比較成熟，穩(wěn)定性也較好。如...

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